Général

Collecte de sperme de l'étalon et manipulation pour l'insémination artificielle

Collecte de sperme de l'étalon et manipulation pour l'insémination artificielle

Le sperme des étalons est généralement collecté avec un vagin artificiel avec l'étalon monté sur une jument en chaleur ou une monture factice. Le sperme fraîchement collecté peut ensuite être évalué et utilisé pour l'insémination artificielle des juments.

Pour démarrer un programme de collecte de sperme / insémination artificielle, les exigences minimales incluent:

  • Un hangar de reproduction, de manière optimale avec une jument fantôme ou une monture factice
  • Un vagin artificiel et des fournitures connexes
  • Équipement de laboratoire, comme un microscope pour évaluer la motilité des spermatozoïdes, une machine de comptage des spermatozoïdes pour déterminer la concentration de spermatozoïdes, un incubateur pour garder les fournitures au chaud et divers ustensiles, tels que des lames de microscope, des pipettes et des gobelets en plastique jetables.

    La plupart des étalons peuvent être facilement formés à la collecte de sperme avec un vagin artificiel à condition que le manipulateur et le technicien de collecte de sperme soient expérimentés. La libido ou la pulsion sexuelle de l'étalon et l'expérience d'élevage de l'étalon sont également des facteurs importants à considérer lors de la formation d'un étalon pour la collecte de sperme.

    Les programmes d'insémination artificielle avec du sperme frais fournissent d'excellents résultats tant que la qualité du sperme est acceptable et que le sperme est manipulé de manière appropriée après la collecte. Il est également très important d'élever la jument au bon moment pendant son cycle; par conséquent, les juments doivent être taquinées jusqu'à ce qu'elles entrent en chaleur, puis évaluées de manière optimale par palpation et / ou échographie afin de déterminer le bon moment de reproduction par rapport à l'ovulation.

    Le principal avantage de l'insémination artificielle avec du sperme frais est qu'un éjaculat peut être divisé entre plusieurs juments qui sont prêtes à être reproduites, augmentant ainsi le nombre de juments pour un étalon particulier dans une saison donnée. La pratique de l'insémination artificielle évite également les risques inhérents à la manipulation d'étalons et de juments pour la couverture naturelle, ou d'élevage de juments qui ne se prêtent pas bien à la reproduction pendant la chaleur.

    Le principal inconvénient de l'insémination artificielle est la nécessité d'un équipement et d'une formation spécialisés. Si le sperme n'est pas traité de manière appropriée et que le moment de l'insémination n'est pas précis, les taux de grossesse peuvent être sous-optimaux dans les programmes d'insémination artificielle.

  • Le sperme des étalons est le plus souvent collecté à l'aide d'un vagin artificiel lors du montage d'une jument en chaleur, d'une jument ovariectomisée ou d'une monture factice. Il existe plusieurs types de vagins artificiels, et les plus couramment utilisés aux États-Unis sont le Missouri, la Colorado State University et les Japonais ou Nishikawa. D'autres méthodes de collecte de sperme sont disponibles, y compris la collecte de sperme avec l'étalon debout sur le sol ou une stimulation manuelle au lieu d'un vagin artificiel. Ce sont de bonnes méthodes alternatives dans certains cas, en particulier avec des étalons ayant des besoins spéciaux, mais elles n'ont pas été largement utilisées pour la collecte de sperme de routine et nécessitent une formation spéciale.
  • Le choix du vagin artificiel à utiliser dépend de la préférence et de l'expérience du technicien en collecte de sperme. Par exemple, le modèle Missouri est facile à manipuler et à laver et la plupart des étalons répondent bien à ce type de vagin. De plus, la longueur de ce vagin correspond à la longueur du pénis de la plupart des étalons en évitant le choc thermique du sperme qui se produira si le sperme est exposé à la veste d'eau intérieure du vagin. La conception élimine également la possibilité de contamination par l'eau de l'échantillon de sperme.

    Préparer le vagin artificiel

  • Avant la collecte de sperme, l'intérieur du vagin doit être propre et sec.
  • Un sac tourbillon stérile ou un autre type de récipient (c'est-à-dire un biberon ou une doublure de biberon) est fixé à l'extrémité distale du vagin artificiel pour recueillir le sperme pendant l'éjaculation.
  • L'intérieur du vagin artificiel est lubrifié avec un lubrifiant stérile hydrosoluble non spermicide (c'est-à-dire que la gelée KY n'est pas acceptable car elle contient une substance bactéricide qui peut affecter la viabilité des spermatozoïdes). Le lubrifiant est répandu en insérant le bras de l'opérateur dans le vagin protégé par un manchon de palpation propre jusqu'aux épaules. Le vagin ne doit être lubrifié qu'aux deux tiers environ de sa longueur pour éviter une contamination excessive de l'échantillon de sperme avec du lubrifiant.
  • La chemise d'eau du vagin est ensuite remplie d'eau chaude du robinet à environ 50 à 55 degrés Celsius. Un thermomètre incassable peut être utilisé pour mesurer la température à l'intérieur de l'ouverture du vagin, mais assurez-vous de retirer le thermomètre avant la collecte de sperme! Une température finale de 42 à 48 C convient à la plupart des étalons. De nombreux étalons ne semblent pas suffisamment stimulés pour éjaculer à des températures plus basses. Des températures supérieures à 50 ° C peuvent brûler le pénis de l'étalon, ce qui entraîne une expérience négative à long terme.
  • Une fois que le vagin artificiel est à la bonne température, la coque extérieure en cuir est sécurisée et la pression de l'intérieur du vagin est ajustée en libérant de l'eau en fonction de la taille du pénis et des préférences de pression de l'étalon à collecter. Certains étalons nécessitent plus de pression que d'autres pour une stimulation adéquate et ce n'est qu'en travaillant régulièrement avec un étalon que l'on peut apprendre ses préférences individuelles. En règle générale, on devrait pouvoir placer son bras confortablement à l'intérieur de la lumière du vagin et faire un poing avec la main.

    Nettoyage et entretien du vagin artificiel

  • Le vagin artificiel doit être soigneusement nettoyé après la collecte de sperme pour éviter à la fois la contamination croisée entre les étalons et la contamination de l'échantillon de sperme. Les étapes de nettoyage exactes varient selon les fermes et les laboratoires.
  • La plupart des gens nettoient d'abord le revêtement en caoutchouc avec de l'eau du robinet uniquement. Ensuite, le revêtement en caoutchouc est immergé dans un bain d'alcool (70% d'alcool isopropylique) pendant environ 20 minutes pour la désinfection et est ensuite suspendu dans une armoire propre pour le séchage. La plupart des détergents laisseront des résidus spermicides même après un rinçage minutieux, il convient donc de les éviter complètement. Les produits en caoutchouc sont particulièrement vulnérables à l'hébergement de résidus spermicides. Les agents spermicides peuvent avoir différents degrés de dommages aux spermatozoïdes. Certains tuent le sperme immédiatement, certains lentement. Il est donc possible que vous ne détectiez pas les dommages, même au microscope, avant l'insémination du sperme, mais les spermatozoïdes endommagés peuvent ne pas produire les taux de grossesse attendus.

    Tous les ustensiles qui entrent en contact avec le sperme doivent être conservés dans un incubateur à 98,6 degrés Fahrenheit (37 ° C). Les diapositives et les lamelles peuvent être conservées au-dessus d'une étape de réchauffement également réglée à 98,6 F (37 C). Un changement soudain de température entraînera une diminution de la viabilité des spermatozoïdes et pourrait compromettre le programme de reproduction. Cependant, les spermatozoïdes meurent également à des températures supérieures à 98,6 F, et la plupart des incubateurs sont installés bien au-dessus de cela. Pour cette raison, le sperme ne doit pas être placé dans un incubateur ou au-dessus d'une étape de réchauffement des diapositives après la collecte, et la température de l'incubateur doit toujours être vérifiée lors du retrait d'un article qui entrera en contact avec le sperme. Il vaut mieux avoir les fournitures qui entrent en contact avec le sperme un peu trop frais qu'un peu trop chaud.

    De même, tous les ustensiles doivent être propres et secs avant tout contact avec l'échantillon de sperme. L'eau et les résidus de détergents ou de désinfectants sont spermicides. Pour cette raison, l'utilisation d'ustensiles jetables est fortement recommandée. Tous doivent être évalués pour s'assurer qu'ils ne sont pas toxiques pour le sperme.

    Traiter les échantillons de sperme dans un laboratoire maintenu à une température ambiante constante d'environ 72 à 75 F (23 à 25 C). L'échantillon de sperme doit être manipulé avec soin. Évitez de verser dans le fond d'un cylindre gradué; au lieu de cela, versez délicatement le côté du cylindre. De plus, évitez l'exposition aux courants d'air froids ou aux rayons directs du soleil. La clé du succès est d'être minutieux mais rapide dans le traitement et l'extension de l'échantillon de sperme, que ce soit pour l'emballage pour l'expédition ou pour l'insémination immédiate à la ferme.

    Encore une fois, une fois l'échantillon de sperme traité, ne le remettez pas dans l'incubateur ou dans un bain d'eau chaude. Au lieu de cela, laissez-le refroidir lentement à température ambiante jusqu'à ce qu'il soit utilisé pour l'insémination artificielle.

    Les pistons en caoutchouc des seringues de type traditionnel sont parfois recouverts d'une substance qui peut être toxique pour le sperme. Des seringues en plastique non spermicide (sans plongeurs en caoutchouc) doivent être utilisées pour manipuler le sperme et pour l'insémination.

    Extenseurs de sperme

    Les extenseurs de sperme sont utilisés pour diluer le sperme fournissant une source d'énergie pour les spermatozoïdes, protégeant les spermatozoïdes contre les changements de température et / ou de pH, et pour éviter une contamination bactérienne excessive de l'échantillon. De manière générale, les extenseurs prolongent la durée de vie de l'échantillon de sperme.

    L'extenseur le plus couramment utilisé à la fois pour l'insémination artificielle et le sperme refroidi transporté est un allongeur à base de lait qui a été développé par le Dr Kenney à l'Université de Pennsylvanie en 1975. Cet allongeur contient du lait écrémé séché non gras (c'est-à-dire Sanalac® ou une marque de magasin ), du glucose et un antibiotique. Les composants sont mélangés dans de l'eau stérile.

    À l'origine, les antibiotiques ajoutés à l'extenseur étaient la pénicilline et la gentamicine. Des recherches plus récentes ont montré que d'autres antibiotiques peuvent être plus adaptés car ils sont moins toxiques pour le sperme au cours du temps de stockage. Actuellement, les antibiotiques les plus couramment utilisés pour les extenseurs de sperme sont la ticarcilline, l'amikacine, une combinaison de pénicilline et d'amikacine, ou la polymyxine B.

    La fabrication de votre propre extenseur nécessite une formation adéquate en compétences de laboratoire, une échelle de laboratoire précise et une source fiable d'eau déionisée stérile, qui peut être achetée bien qu'elle soit coûteuse. Sinon, les composants pré-mesurés de l'extenseur et de l'eau pré-mesurée peuvent être obtenus commercialement auprès de différentes sociétés vendant des fournitures pour la collecte de sperme équin et l'insémination artificielle.

    Évaluation du sperme à la ferme

    De manière optimale, le volume, la concentration de spermatozoïdes et le pourcentage de spermatozoïdes progressivement mobiles doivent être évalués pour chaque éjaculat. Par conséquent, chaque établissement d'élevage devrait avoir un laboratoire équipé d'un incubateur, de contenants de sperme jetables (tasses ou cylindres gradués), d'un microscope et de certains moyens d'évaluation du sperme.

    Les étapes suivantes sont suggérées pour l'évaluation de l'échantillon de sperme:

  • Apparence de l'échantillon. Cela se réfère principalement à la couleur. Le sperme est normalement blanchâtre à grisâtre et crémeux à translucide selon la concentration de sperme. Par exemple, un échantillon jaune peut indiquer une contamination avec de l'urine, et un échantillon rose ou teinté de brun peut indiquer une contamination avec du sang, les deux tuant le sperme. Un échantillon transparent peut indiquer que seul du liquide séminal et aucun sperme ont été éjaculés. Tout amas, lambeaux ou autres débris doivent être notés.
  • Le volume. Ceci est mesuré en plaçant le sperme dans un cylindre ou une tasse gradué précis. Le volume n'est important que pour calculer le nombre total de spermatozoïdes dans l'échantillon et n'a aucune incidence directe sur la qualité de l'éjaculat.
  • Concentration. La concentration de sperme dans l'échantillon peut être mesurée au moyen d'un hémocytomètre ou de machines disponibles dans le commerce spécialement conçues pour compter les spermatozoïdes d'étalon. La concentration est donnée sur des millions de spermatozoïdes par millilitre de sperme. La concentration de sperme n'a pas de sens en soi en ce qui concerne la qualité du sperme et n'est importante que pour calculer le nombre total de spermatozoïdes.
  • Nombre total de spermatozoïdes. Le nombre total de spermatozoïdes peut être calculé en multipliant le nombre de spermatozoïdes par millilitre (ou concentration) fois le volume de l'échantillon. Le nombre total de spermatozoïdes est traditionnellement exprimé en milliards.
  • Pourcentage de spermatozoïdes mobiles. Le pourcentage de spermatozoïdes mobiles est évalué en plaçant une goutte de sperme sur une lame de microscope chaude et une lamelle chaude et en l'observant sous le microscope. On estime généralement deux types de motilité des spermatozoïdes. La motilité totale est le pourcentage de spermatozoïdes qui se déplacent, sous n'importe quelle forme ou direction. La motilité progressive ne comprend que le pourcentage de spermatozoïdes se déplaçant en ligne droite et est le plus important.
  • Nombre total de spermatozoïdes progressivement mobiles. Une dose d'élevage avec du sperme frais et prolongé devrait contenir au moins 500 millions de spermatozoïdes progressivement mobiles. Une fois que le nombre total de spermatozoïdes a été calculé et que le pourcentage de spermatozoïdes progressivement mobiles a été évalué, on peut calculer le nombre total de spermatozoïdes progressivement mobiles. Cela nous permettra de savoir combien de juments peuvent être reproduites avec un éjaculat donné.

    Préparation du sperme

    Une fois le sperme recueilli et évalué de manière appropriée, il est prêt pour l'insémination des juments. Bien que ce ne soit pas toujours nécessaire, l'ajout d'un extenseur pour l'insémination optimisera la survie du sperme pendant le temps nécessaire pour préparer la jument à la reproduction et réduira la contamination de l'utérus de la jument lors de la reproduction. Ceci est particulièrement important chez les juments susceptibles de développer des infections utérines après la reproduction. Pour une insémination immédiate, l'ajout d'un volume d'extenseur égal à celui du sperme (rapport de dilution 1: 1) est généralement suffisant et ne nécessite aucun calcul spécial.

    Tant qu'il y a suffisamment de spermatozoïdes progressivement mobiles, l'éjaculat étendu est simplement divisé entre le nombre de juments à reproduire, ou l'éjaculat entier est utilisé pour élever une seule jument. La dose minimale d'insémination nécessaire pour éviter de compromettre les taux de fertilité est de 500 millions de spermatozoïdes progressivement mobiles par jument. Cependant, autant de sperme que possible doit être utilisé pour l'insémination.

    Préparation de la jument

    Une fois qu'il est certain qu'une jument (ou un groupe de juments) est prête pour la reproduction, la queue de la jument est enroulée et la zone périnéale autour de la vulve est soigneusement nettoyée et rincée généreusement trois fois. Des gommages à l'iode povidone peuvent être utilisés à cette fin, mais tous les résidus doivent être soigneusement rincés à l'eau pour éviter d'introduire ce désinfectant dans l'utérus lors de l'insertion de la pipette pour l'insémination. Après un lavage et un rinçage approfondis, la zone périnéale est séchée avec des serviettes en papier propres. La jument est prête pour l'insémination.

    Procédure d'insémination

    En préparation à l'insémination artificielle, le volume correspondant de sperme étendu est aspiré dans une ou plusieurs seringues (sans piston en caoutchouc) connectées à une longue pipette en plastique jetable.

    Le vétérinaire ou le gestionnaire effectuant la procédure doit porter un manchon en plastique propre et un gant stérile sur la main qui sera utilisé pour introduire la pipette dans l'utérus. La main gantée peut être lubrifiée avec une gelée stérile soluble dans l'eau pour faciliter la procédure. Ensuite, la pipette est placée dans cette main et dirigée à travers les lèvres vulvaires, le vestibule, dans le vagin, puis insérée à travers le col de l'utérus, tandis que la main opposée reste à l'extérieur de la jument pour pousser le piston de la seringue et injecter le sperme à travers la pipette . Pour une insémination réussie, le sperme doit être déposé à l'intérieur de l'utérus.