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Transfert d'embryons à Mares

Transfert d'embryons à Mares

Le transfert d'embryons est une technique de reproduction assistée par laquelle un embryon est transféré de l'utérus d'une jument donneuse à l'utérus d'une jument receveuse qui mènera la grossesse à terme. L'embryon est généralement récupéré de la jument donneuse par lavage utérin (lavage) environ 6 à 8 jours après l'ovulation. L'embryon est ensuite placé dans l'utérus d'une jument receveuse synchronisée.

Les avantages

  • Une jument précieuse peut produire plus d'un poulain par saison.
  • Les juments peuvent être en compétition tout en produisant des poulains.
  • Les jeunes juments génétiquement précieuses peuvent commencer à produire des poulains avant d'atteindre la maturité physique ou pendant l'entraînement.
  • Les juments âgées incapables de porter elles-mêmes un poulain en raison d'une pathologie basée sur la biopsie utérine peuvent continuer à produire des poulains.
  • Les juments ayant une incapacité physique empêchant la grossesse ou la mise bas, comme une déchirure des muscles abdominaux ou de vieilles fractures pelviennes, peuvent toujours produire une progéniture.

    Désavantages

  • La procédure est coûteuse.
  • Des restrictions ou interdictions sont appliquées par certaines associations de race.
  • Le transfert d'embryons chez les juments nécessite une formation spécialisée et, par conséquent, toutes les installations équines ou les praticiens ne sont pas prêts à offrir ce service

    Le succès de cette procédure dépend de la capacité à contrôler l'un des facteurs suivants:

  • La fertilité inhérente de la jument donneuse, qui ne peut être contrôlée. En outre, dans de nombreux cas, la sous-fertilité est la raison pour laquelle certaines juments deviennent des candidats au transfert d'embryons.
  • La fertilité inhérente des juments receveuses. Ces juments doivent être choisies en fonction de leur jeune âge et d'un appareil reproducteur normal.
  • La gestion ou le moment de la reproduction doivent être appropriés lors du transfert d'embryons.
  • La technique de récupération et de transfert d'embryons. L'expérience du vétérinaire joue un rôle important dans le succès de la procédure.
  • Degré de synchronisation du donneur et du receveur. Les juments donneuses et receveuses sont synchronisées avec l'utilisation d'hormones; une synchronisation étroite est importante pour garantir que l'embryon est transféré dans un environnement utérin approprié.

    Équipement pour le transfert d'embryons

    Le démarrage d'un programme de transfert d'embryons nécessite la création d'un laboratoire spécialisé. L'équipement de transfert d'embryons est disponible dans le commerce auprès de la plupart des entreprises qui vendent des produits d'élevage équin. Outre l'équipement habituel utilisé pour la reproduction assistée de routine, comme une machine à ultrasons, les éléments suivants sont requis:

  • Cathéters de Foley pour rincer l'utérus du donneur. Il s'agit d'un type spécial de cathéter utilisé pour rincer l'utérus de la jument donneuse afin de récupérer l'embryon. Un ballon à son extrémité permet le logement du cathéter dans le col de l'utérus, empêchant la perte de liquide pendant la procédure de rinçage.
  • Tubes et connecteurs supplémentaires qui sont attachés à l'extrémité du cathéter Foley pour introduire et rincer le liquide de l'utérus de la jument.
  • Filtres spéciaux pour récupérer l'embryon du liquide de rinçage.
  • Un microscope à dissection pour rechercher l'embryon.
  • Boîtes de culture stériles, pipettes capillaires en verre et divers ustensiles de laboratoire.

    Le milieu de rinçage le plus couramment utilisé pour le transfert d'embryons est la solution saline tamponnée au phosphate (DPBS) de Dulbecco complétée par 10 pour cent de sérum de veau fœtal et d'antibiotiques. Ce milieu est également utilisé pour laver et transférer l'embryon dans l'utérus du receveur. Le milieu peut être acheté sous forme liquide ou en poudre et reconstitué en laboratoire. Comme alternative au DPBS, qui est cher, certains praticiens utilisent plutôt la solution de sonneries lactées.

    Avant de tenter de récupérer l'embryon, tous les ustensiles et les supports doivent être réchauffés à la température corporelle dans un incubateur pour éviter un choc froid sur l'embryon. Tout l'équipement doit être jetable ou lavé correctement et stérilisé avant utilisation. Aucun détergent ou désinfectant ne doit être utilisé pour laver l'équipement de transfert d'embryons, car ils peuvent laisser des résidus qui pourraient compromettre la viabilité de l'embryon. L'équipement est lavé uniquement avec de l'eau chaude du robinet, puis est soigneusement rincé avec de l'eau distillée. Les cathéters, tubes et filtres réutilisables doivent être stérilisés au gaz avant utilisation.

    Les cathéters de Foley séparés doivent être réservés aux procédures de récupération d'embryons et non mélangés à ceux utilisés pour laver l'utérus des juments infectées.

    Choix des destinataires pour le transfert d'embryons

    Il vaut la peine d'investir du temps et de l'argent dans le choix des receveurs optimaux, car il serait inutile d'investir des ressources et de l'expertise dans l'élevage d'une jument donneuse et la récupération d'un embryon, puis de le placer dans l'utérus d'une jument qui ne pourrait pas porter un poulain à terme. Par conséquent, toutes les juments achetées dans le but de devenir des bénéficiaires d'un programme de transfert d'embryons doivent être soumises à un examen complet de la solidité de la reproduction. Toutes les juments qui parviennent au programme receveur doivent passer tous les aspects de l'ESB et avoir un endomètre sain (muqueuse de l'utérus) lorsqu'elles sont évaluées dans un échantillon de biopsie.

    L'âge des bénéficiaires est également important. Il est plus probable qu'une jument mature mais relativement jeune (5 à 8 ans) sera en mesure de porter un poulain à terme. Souvent, les juments achetées comme récipiendaires sont acquises par le biais d'enchères publiques et l'âge est inconnu. Il faut être sûr d'évaluer l'âge par l'évaluation des dents.

    Idéalement, les juments d'un programme receveur doivent être choisies en fonction d'une taille corporelle similaire ou légèrement supérieure à la taille de la race de la jument donneuse. Il est connu que la taille de la jument influencera la taille du poulain, indépendamment de l'apport génétique du donneur.

    Enfin, il vaut la peine de choisir des juments avec une bonne prédisposition, non seulement parce qu'elles seront beaucoup plus faciles à manipuler tout au long du processus, mais aussi parce qu'elles peuvent faire de meilleures mères. À cet égard, il devrait être idéal de connaître les antécédents d'une jument et de choisir une jument qui a pouliné sans incident dans le passé. Non seulement sauriez-vous avec certitude que la jument est capable de porter un poulain à terme, mais aussi la maternité de la jument. Malheureusement, sauf indication contraire du client, le passé des juments receveuses est souvent inconnu.

    Protocole de synchronisation pour le donateur et les destinataires

    De nombreux protocoles de synchronisation pour le donneur et le receveur sont utilisés, selon les préférences et l'expérience personnelles. Les hormones sont données au donneur et aux receveurs pour manipuler leur cycle œstral dans le but qu'ils entrent tous en chaleur en même temps. Ces traitements peuvent varier de donner aux juments un seul coup de prostaglandine, à placer les juments dans un programme de traitement complet de coups de progestérone et d'oestrogène.

    Bien que lourde, une série de doses de progestérone / œstrogène offrent la meilleure synchronisation entre le donneur et les receveurs. En bref, le protocole consiste en une injection quotidienne d'une combinaison de progestérone et d'œstrogène pendant 8 à 10 jours (150 mg de progestérone plus 10 mg d'Estradiol-17b par injection). Cela supprime les hormones de la jument et lorsque le traitement est interrompu, la plupart des juments devraient entrer en chaleur en 3 à 5 jours. Parce que certaines juments peuvent ovuler pendant le traitement, une injection de prostaglandine est généralement administrée à la fin de la série progestérone-œstrogène pour une meilleure synchronisation.

    Les progestatifs oraux commercialisés pour garder les juments à l'abri de la chaleur ne fonctionnent pas aussi bien pour les protocoles de synchronisation.

    Une fois que le donneur et les receveurs sont en chaleur et que la jument donneuse est accouplée à l'étalon approprié, l'ovulation peut être induite chez toutes les juments en leur donnant une dose de gonadotrophine chorionique humaine. Cela garantira une synchronisation de l'ovulation plus étroite entre le donneur et le receveur. Un receveur est idéal si elle ovule le même jour ou un jour après le donneur. Les receveurs moins idéaux sont ceux qui ovulent un jour avant ou plus loin que la date d'ovulation du donneur.

    Malheureusement, même les meilleurs protocoles de synchronisation peuvent échouer et les donneurs et les receveurs peuvent ne pas toujours entrer en chaleur synchronisée et ovuler comme prévu. C'est une bonne raison d'avoir toujours plus d'un receveur disponible pour chaque jument donneuse. Au moins deux receveurs par donneur sont recommandés, trois seraient idéaux.

    Gestion de l'élevage de la jument donneuse

    Le premier facteur limitant de la réussite du programme de transfert d'embryons est que la jument donneuse doit tomber enceinte. Il est donc impératif de pratiquer une bonne gestion de l'élevage de la jument donneuse.

    La jument donneuse peut être élevée avec du sperme frais ou transporté refroidi. Il est important que le sperme soit de bonne qualité et que l'étalon ait de bons taux de grossesse établis. De toute évidence, l'étalon idéal pour une jument n'est pas toujours choisi en fonction de son potentiel de fertilité. Cependant, les étalons anciens et non fertiles doivent être évités pour éviter d'introduire un autre facteur qui pourrait empêcher le succès du programme de transfert d'embryons. Pour cette même raison, l'utilisation de sperme congelé-décongelé doit être évitée.

    La gestion optimale de l'élevage consiste à élever une jument pendant l'œstrus le plus près possible de l'ovulation. Idéalement, l'appareil reproducteur du donneur et des receveurs doit être examiné quotidiennement par palpation et échographie par rectum pour déterminer le moment optimal pour la reproduction du donneur et pour évaluer la synchronisation avec les receveurs.

    Autour de la reproduction, le donneur doit recevoir une injection de gonadotrophine chorionique humaine pour induire l'ovulation, et les receveurs sont traités de la même manière (mais non élevés) pour une synchronisation de l'ovulation plus serrée.

    L'ovulation doit toujours être confirmée par échographie. Le jour de l'ovulation est considéré comme «jour 0» et l'utérus de la jument donneuse est généralement rincé le jour 7 après l'ovulation.

    Procédure de collecte d'embryons

    La récupération des embryons de la jument donneuse est généralement effectuée au jour 7 postovulation. Tout d'abord, la jument est vérifiée par palpation et échographie par rectum pour vérifier le ton et l'apparence de l'utérus. Une jument gravide aura très probablement un utérus très tonique et homogène, un col fermé, et il n'y aura pas de liquide dans l'utérus comme visualisé par échographie. À ce moment, l'embryon est trop petit pour être vu à l'échographie.

    La jument est préparée pour la récupération embryonnaire en nettoyant la zone périnéale (vulve, anus et fesses) avec du gommage à la povidone iodée (Betadine) trois fois, et en rinçant soigneusement avec de l'eau après chaque gommage. Après un rinçage généreux, la zone est séchée avec des serviettes en papier propres.

    La personne effectuant la récupération par transfert d'embryon doit porter des manches de palpation propres et des gants stériles, et une gelée stérile à base d'eau doit être utilisée pour la lubrification. Une main est introduite dans le vagin de la jument pour faire passer le cathéter Foley à travers le col et dans le corps de l'utérus. Ensuite, le ballonnet du cathéter est gonflé à l'aide d'une petite seringue et est donc solidement logé dans le col de l'utérus pour éviter de perdre du liquide pendant le rinçage utérin.

    Il faut au moins deux personnes pour effectuer la procédure de collecte d'embryons, une tenant le cathéter dans le tractus de la jument, et un assistant aidant à l'insertion et à la récupération des fluides. Un litre de liquide est acheminé par gravité dans l'utérus de la jument, puis récupéré dans un grand cylindre en verre ou directement passé à travers un filtre pour piéger l'embryon. Ceci est répété trois fois.

    Une partie du liquide doit être conservée dans le filtre de récupération pour éviter le dessèchement de l'embryon. Une fois la procédure de récupération terminée, le fluide contenu dans le filtre est décanté dans une boîte de Pétri. La recherche de l'embryon est réalisée sous grossissement au microscope à dissection.

    Procédure de transfert d'embryons

    Si la récupération est effectuée au jour 7 postovulation, l'embryon doit être au stade blastocyste et doit être facile à visualiser au microscope à dissection par un opérateur expérimenté.

    Une fois trouvé, l'embryon est lavé dans du DPBS stérile avec 10% de sérum de veau fœtal. Les embryons peuvent être manipulés avec 0,25 ml de paillettes de congélation de sperme français ou des pipettes en verre connectées à une poire en caoutchouc ou à une petite seringue à tuberculine.

    L'embryon est généralement transféré par voie transcervicale, c'est-à-dire à travers le col de la jument comme s'il s'agissait d'une insémination artificielle. Dans ce but:

  • Le destinataire choisi est préparé pour le transfert en enveloppant et en attachant sa queue. Son utérus doit être vérifié pour le ton et les signes de liquide. L'embryon ne doit jamais être transféré à une jument qui a du liquide dans l'utérus.
  • Ensuite, la zone périnéale de la jument receveuse est soigneusement nettoyée comme expliqué pour le donneur.
  • L'embryon peut être chargé dans une pipette d'insémination connectée à une seringue Air-Tite de 5 ml. Environ 1 ml d'air est d'abord chargé dans la seringue, puis la pipette est chargée de trois petites poches de milieu séparées par des poches d'air, la poche de fluide au milieu contenant l'embryon.
  • La personne effectuant la procédure de transfert doit porter un gant stérile chirurgical sur un manchon en plastique d'épaule propre. La pipette est insérée dans le vagin et soigneusement passée dans le col de l'utérus. Une fois avancé dans le corps utérin, le piston de la seringue est poussé vers l'avant et l'embryon est injecté dans l'utérus.
  • La jument receveuse doit être vérifiée pour la grossesse environ 7 jours après le transfert.

    Une autre possibilité consiste à effectuer un transfert d'embryon chirurgical. Cela se fait avec le receveur sous sédation en position debout grâce à une incision du flanc qui permet l'extériorisation de la corne utérine. Il n'y a aucun avantage évident à transférer chirurgicalement des embryons, et la procédure est plus traumatisante pour la jument receveuse.

    Dans certains cas, les propriétaires ou les praticiens effectuant le transfert d'embryons choisissent de ne pas avoir d'embryons pour une jument donneuse donnée. Cela évite les tracas d'achat, de vérification et de maintenance des destinataires, ainsi que les dépenses et le travail liés à la synchronisation. Dans ce cas, l'embryon récupéré peut être expédié à un établissement de référence qui détient de nombreux destinataires disponibles pour le transfert à tout moment donné. Les inconvénients de cette alternative sont les risques liés à l'expédition d'un embryon et également que les taux de grossesse peuvent être légèrement réduits lorsqu'un embryon n'est pas transféré immédiatement après la collecte.

    Pour l'expédition, les embryons sont emballés dans un flacon stérile contenant un milieu commercialisé, Hams F-10, qui est tamponné en le diffusant avec un mélange de 90% d'azote, 5% d'oxygène et 5% de dioxyde de carbone. Le milieu préparé peut être commandé auprès de l'établissement de transfert juste avant d'effectuer la procédure de récupération de l'embryon. Ce milieu est également complété par du sérum de veau fœtal et des antibiotiques.

    Une fois collecté et lavé, l'embryon est placé dans un flacon en plastique stérile de 3 ml contenant un milieu chaud équilibré, puis placé à l'intérieur d'un tube à centrifuger de 50 ml contenant un milieu, par précaution.

    Le tube de 50 ml est conditionné dans un Equitainer pour une expédition refroidie.

    Les embryons emballés doivent être expédiés par la compagnie aérienne ou par un service de messagerie de nuit et transférés dès qu'ils atteignent l'installation de transfert, de manière optimale avant 24 heures après la récupération.